活化蛋白C(APC)是一種抗凝血絲氨酸蛋白酶,來源于兩條鏈,依賴于維生素K的酶原,蛋白C(3-7)。α-凝血酶和血栓調(diào)節(jié)蛋白之間的復(fù)合物催化蛋白C重鏈中Arg-12(牛中的Arg-14)的單裂,從而生成活化的C蛋白。幾種非生理相關(guān)的蛋白酶,例如RVV-X激活劑,胰蛋白酶和PROTAC也能夠激活C蛋白。
APC用作抗凝血?jiǎng)纱呋o因子Va和VIIIa因子的蛋白水解失活,從而導(dǎo)致凝血酶原酶和Xase因子復(fù)合物的抑制。因子Va和VIIIa的失活都是Ca2 +和磷脂依賴性的。維生素K依賴的輔因子蛋白S通過與APC形成1:1的復(fù)合物(Kd = 6x10-9M)適度提高了失活率(8)。
有幾個(gè)因素減弱了APC的抗凝活性。Xa因子通過競爭因子Va上相似的結(jié)合位點(diǎn)來保護(hù)因子Va免受APC的蛋白水解作用。凝血酶也已被提議通過蛋白S的蛋白水解失活作為APC的調(diào)節(jié)劑。此外,APC還受循環(huán)肝素依賴性蛋白的調(diào)節(jié)C抑制劑(PAI-3),肝素非依賴性循環(huán)蛋白C抑制劑,血小板衍生的蛋白C抑制劑和PAI-1。據(jù)報(bào)道,在APC和兩種PAI類型之間形成的復(fù)合物可說明在輸注APC或體內(nèi)產(chǎn)生APC時(shí)觀察到的纖維蛋白溶解增加。
除了我們的標(biāo)準(zhǔn)APC制劑以外,還可以使用含有Dansyl-EGR-氯甲基甲酮的活性位點(diǎn)封閉形式。
活化的蛋白C是由純化的蛋白C通過凝血酶激活,然后進(jìn)行離子交換色譜法制得的(4)。APC以50%(體積/體積)甘油/水的形式提供,應(yīng)儲(chǔ)存在-20oC下。通過SDS-PAGE分析確定純度,并使用生色底物測定法測量活性。還按照APC耐藥性分析的要求測試了所有生產(chǎn)批次的APC延長正常人血漿aPTT的能力(10,11)。每個(gè)批次的測試結(jié)果均以aPTT(+/- APC)比(10nM APC)的形式提供。