代碼:02-711
該cDNA文庫(kù)(質(zhì)粒DNA)是由大阪大學(xué)微生物疾病研究所的野島弘教授通過Linker-Primer方法(參考文獻(xiàn)1)由非洲爪蟾卵母細(xì)胞衍生的poly(A)+ RNA構(gòu)建的。通過使用寡核苷酸(dT)18接頭引物單向克隆該文庫(kù),該引物包含Not I和BamHI(Bgl II)-Sma I銜接子的限制性酶切位點(diǎn)。 該文庫(kù)中使用的pBA2載體具有pUC ori,可在大腸桿菌和Ampr中復(fù)制,作為選擇標(biāo)記。
應(yīng)用 PCR篩選已知或未知基因:制備已知或未知基因(cDNA)的引物,并通過PCR從該文庫(kù)中擴(kuò)增該基因,然后克隆至合適的載體??捎糜诖笠?guī)模蛋白質(zhì)生產(chǎn)和探針制備等。 標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增條件:以10-100 ng cDNA為模板,進(jìn)行35個(gè)PCR反應(yīng)循環(huán)。(根據(jù)特定基因的mRNA的表達(dá)水平來改變模板的數(shù)量和循環(huán)數(shù)。)
規(guī)格 數(shù)量:在10 mM Tris-HCl-1mM EDTA(pH 7.5)中,500 ng(40 ng / ul 13ul) 質(zhì)量:1)獨(dú)立克隆數(shù):1.1 x 106 2)平均插入片段大小:大于1 kb 儲(chǔ)存溫度:-20℃ |