QA-Bio提供易于使用的去糖基化試劑盒，可在天然和變性條件下從糖蛋白中去除N-連接和O-連接的聚糖。
PNGase F通常用于在變性和天然條件下都只對含有N-連接聚糖的糖蛋白進(jìn)行去糖基化。對于被PNGase F緩慢裂解的天然樣品或在PNGase F消化后沉淀的天然樣品，建議使用我們的Endo F Multi-Kit。兩種方法均能使聚糖完整無損，并可供進(jìn)一步分析。
如果聚糖類型未知，或者同時包含N-和O-聚糖，則建議使用我們的Enzymatic CarboRelease Kit或Enzymatic DeGlycoMx Kit。這些去糖基化試劑盒包括許多酶，這些酶會去除聚糖并將其消化成單糖。在DeglycoMx試劑盒中，酶以預(yù)混合的酶混合物的形式包裝在一個20升的小瓶中。對于CarboRelease試劑盒，酶分別在20微升的小瓶中單獨提供，從而在測定設(shè)計中具有更大的靈活性。
LudgerLiberate水解酶解試劑盒包含用于從糖蛋白生物制藥中釋放N和O聯(lián)聚糖的試劑。釋放的聚糖具有自由的還原末端，可以通過還原胺化進(jìn)行熒光標(biāo)記。釋放條件可以針對N-聚糖，O-聚糖或N-和O-聚糖兩者的釋放進(jìn)行優(yōu)化。
對于釋放和回收O-連接的聚糖，我們建議使用Ludger Orela試劑盒。
該試劑盒包括使糖蛋白去糖基化，去除所有N-連接的寡糖和許多O-連接的糖所需的酶和緩沖液。
的酶被分別包裝在單獨的20微升小瓶中。與我們的酶混合物KE-DGMX相比，這使研究人員可以靈活地更充分地表征與其糖蛋白相連的聚糖。
零件編號：KE-DG01
單個糖苷酶的適當(dāng)使用可以確定唾液酸化（僅使用唾液酸酶）和N-連接聚糖（僅使用PNGase F）和O-連接聚糖（使用唾液酸酶，β-半乳糖苷酶，O-糖苷酶和葡萄糖苷酶）的特定存在）。或者，QA-Bio在我們的DeGlycoMx試劑盒（KE-DGMX）中的一個20升小瓶中產(chǎn)生酶的預(yù)混合溶液。 | |
| 其他提供的試劑：
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特異性 | |
試劑盒容量
方案中推薦的酶量足以在給定時間內(nèi)將約100μg的平均糖蛋白去糖基化。PNGase F裂解通常是限速反應(yīng)，這是由于緩慢清除一些空間受阻的N連接殘基，即使糖蛋白變性也是如此。由于所有酶在反應(yīng)條件下都可以保留幾天的活性，因此，如果延長孵育時間，則大量的糖蛋白可能會被去糖基化。相反，如果裂解的糖蛋白量遠(yuǎn)小于100μg，則無需使用推薦量的酶?？梢詫⑦@些酶稀釋到1X反應(yīng)緩沖液7中。它們將在4°C下以稀釋形式保持穩(wěn)定。
牛胎球蛋白控制蛋白
牛胎球蛋白包含唾液酸化的N和O連接寡糖13。
注意：胎球蛋白的商業(yè)制劑中包含的蛋白酶會終降解該蛋白。Fetuin Control已在90°C熱處理10分鐘，以使蛋白酶失活。Fetuin溶液可以在4℃下保存。
變性方案
1.在Eppendorf管中的30 µL去離子水中溶解100 µg或更少的糖蛋白。
2.加入10μL5X反應(yīng)緩沖液7和2.5μL變性溶液。輕輕混合。
3.在100°C加熱5分鐘。
注意：與SDS一起加熱時，某些蛋白質(zhì)可能會沉淀。在這種情況下，請省略熱處理，并在添加酶后將孵育時間延長至24小時。
4.冷卻至室溫。加入2.5μlTriton X-100溶液。輕輕混合。
注意：未添加Triton X-100可能會導(dǎo)致某些酶的活性降低。
5.每種酶各添加1μL。
6.在37°C下孵育3小時。
?7.按選擇的方法進(jìn)行分析。
或者，可以單獨或順序添加酶，以確定糖蛋白上存在何種類型的寡糖。
非變性方案
1.在Eppendorf管中的35μL去離子水中溶解100μg或更少的糖蛋白。
2.添加10μL5X反應(yīng)緩沖液7。3
?.添加1μL每種酶。
?4.在37°C下孵育1-5天。
應(yīng)使用變性方案將等分試樣去糖基化，以提供*去糖基化蛋白質(zhì)的凝膠標(biāo)準(zhǔn)品。然后可以將天然蛋白質(zhì)的位置與此標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較，以判斷去糖基化的程度。
